【終於.......】評論

(B)參考：非洲豬瘟檢驗方法(A)病毒之培養與增殖主要以非洲綠猴腎臟株化細胞(African green monkey kidney cells; MARC-145)為宿主細胞。血清中和抗體檢測法(serum neutralization test)或豬生殖與呼吸綜合症間接螢光抗體檢測參考：豬生殖與呼吸綜合症病毒中和抗體檢測技術之建立與運用參考：https://vettech.nvri.gov.tw/view.php?theme=web_structure&id=1527(C)豬隻之臨床病例常見檢測方法如下：一、病毒分離（virus isolation）。二、病理組織學診斷，包括原位雜交（in situ hybridization；ISH）及免疫組織化學染色（immunohistochemistry；IHC）。三、聚合酶鏈反應（polymerase chain reaction；PCR）、定量聚合酶鏈反應（quantitative polymerase chain reaction）及限制酶切割片段多型性（restriction fragment length polymorphism；RFLP）。四、血清學檢測，包括間接免疫螢光法（indirect immunofluorescense assay；IFA, 圖2）、免疫過氧化酶單層細胞測定法（immunoperoxidase monolayer assay；IPMA）、酵素連接免疫吸附法（enzyme linked immunosorbentassay；ELISA）以及血清中和試驗（Neutralization test）。參考：淺談第二型豬環狀病毒(D)二、血清學測定1.中和抗體測定：　　中和抗體測定為傳統、標準的血清學測定方法。豬隻感染 PR 病毒後，抗體產生緩慢，力價也不高。大約在感染後7天始測得很低的抗體，約在 3 週後達最高。2.免疫擴散測定：　　免疫擴散為抗原、抗體在半固體瓊脂中互相擴散，在兩者適當的濃度比例處凝集沈澱成線，可用肉眼判讀的古老測定方法。利用胰蛋白酶溶解（Solublize）病毒顆粒封套上或感染細胞膜上的病毒特異性醣蛋白做為抗原。　　免疫擴散測定方法十分簡捷，不需貴重儀器設備，適合第一線之作業，所需時間短，24 小時內即可判定，特異性高，但敏感性不足為其缺點。因在低抗體情況下，沈降線極靠近洞緣，不易判讀。所得結果陽性率較中和抗體測定者稍低。 3.酵素結合免疫吸附反應（ELISA）　　ELISA 是一種快速、高度敏感性的測定方法，通常是將抗原吸附於 96 孔 EIA 盤上，滴入待測血清後，加入抗豬免疫球蛋白標示抗體，再以受質呈色後，以判讀機判讀之。　　其他血清學測定方法尚有 HI, Latex 凝集反應等皆可應用。三、細胞免疫測定1.皮內遲發型過敏性反應：　　將 PR 病毒抗原經不活化處理後，注入豬隻下耳臉、尾根部或其他部位皮內，24小時後由注射部位的紅腫與否判定是否感染過 PR。試驗證實，PR 病毒感染細胞培養液以硫酸銨沈澱後，以 56℃，3 小時不活化處理做為抗原，注入豬隻下眼臉及尾根部皮內，下眼臉之反應十分強烈，尾根部的反應則較溫和（圖 十六,十七,十八）。由組織病理切片中亦可發現，皮下水腫，單核球及漿細胞浸潤等特徵性變化（圖 十九）。 豬感染 PR 病毒後，細胞免疫反應比抗體產生較早，因此可比抗體測定早期偵測出 PR 之感染，俾利疫性之控制。皮內反應中和抗體測定及免疫擴散測定三者間之特異性及敏感性相若（表 2）。2.淋巴球芽生測定：　　由於豬隻感染 PR 病毒後，其淋巴球受到病毒抗原致敏化（Sensitized），將此淋巴球取出後，在3H-thymidine 同位素培養液中與病毒抗原共同培養之，淋巴球受到刺激即分裂增生攝入 3H-thymidine 同位素，然後由閃光計數儀（Scitilation counter）測定攝入量，由刺激指數（Stimulation index）計算其反應程度。　　在試驗中從頸靜脈採取之週邊淋巴球與 PR 病毒抗原共同培養後，其刺激指數未見顯著增加（圖廿）。四、病毒及其核酸鑑定1.病毒分離：　　依前述的病毒分離技術，由其形成之 CPE 及其生化性狀，中和試驗加以鑑定。2.螢光抗體染色：　　採取病畜組織器官（如扁桃腺），予以冷凍切片，經直接或間接螢光標示抗體染色可資鑑定。3.核酸雜合（Hybridization）及聚合酶鏈鎖反應（PCR）：　　這些是最新發展的高度敏感性，鑑定潛伏感染的技術。可疑豬隻若含有微量的病毒核酸可以雜合技術與探針結合，或利用聚合酶加以放大證實病毒的存在。也可以用基因缺陷疫苗區分疫苗與野外毒，在將野外毒自豬場清除。參考：https://vettech.nvri.gov.tw/view.php?theme=web_structure&id=1045