問題詳情

第三大題 (14 分)我們究竟是如何利用 PCR 來篩檢新冠肺炎病毒的?即時聚合酶連鎖反應(Real-time PCR),又稱為定量即時聚合酶連鎖反應(Quantitative real-time PCR,簡稱 qPCR),此項技術解決了精確定量上的問題。qPCR 改進了傳統的 PCR 方法。新冠病毒所帶有的遺傳物質為 RNA 而非 DNA,確切來說,所進行的是定量即時反轉錄聚合酶連鎖反應(quantitative real-time reverse transcription polymerase chain reaction , qRT-PCR)。新冠病毒為 RNA 病毒,需先將 RNA反轉錄為 DNA,再進行 DNA 複製放大。以下有關 qPCR 原理簡述如下:
 (1)在 PCR 過程中加入一段核苷酸短鏈作為探針(probe),此探針在短鏈的兩端帶有螢光劑,能夠辨識特定 DNA 序列而黏附於其上。
(2)靠近 5'端的螢光劑稱之為報導者(reporter),而靠近 3'端的螢光劑稱之為冷卻者(quencher),冷卻者可以使報導者無法發出螢光。
 (3)PCR 反應進行一段時間後,聚合酶會破壞探針,使報導者游離並發出螢光。
 (4)若待檢測樣品中含有較多 DNA 分子,偵測到預設螢光強度所需的鏈鎖反應循環次數就較低。
 (5)一般會設定特定的螢光強度作為閾值,樣本達到偵測最低閾值所需要的 PCR 循環數,稱為「Ct 值」(cycle thresholdvalue)。研究者可以比對未知樣本與已知濃度樣本的 Ct 值,進而反向推算未知樣本的濃度。台灣目前新冠肺炎陽性的判讀標準是設在 35 以下,並配合多次的檢驗來提高精確度。


【題組】1.根據本文的描述,下列敘述何者正確?(單選)
(A)冷卻者(quencher)會發出螢光,報導者(reporter)不會
(B)可推測探針不具有專一性,可黏附於 DNA 樣本的任何位置
(C) qPCR 可以進行精確定量檢測,PCR 則不行
(D)可推測Ct 值應該與檢驗樣本的濃度成正比。(2 分)

參考答案

答案:[無官方正解]
難度:計算中-1
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