問題詳情

50. 以化學切割錯誤的鹼基(Chemical cleavage of mismatch duplexes; CCM)偵測單一鹼基變異,反應步驟正確的順序為:①以化學藥劑針對mismatch鹼基進行修飾 ②將欲分析之DNA 與正常DNA混合後加熱至95℃再降溫至65℃ ③加入piperidine進行切割 ④利用螢光標示引子 合成PCR產物
(A)①②③④
(B)②①④③
(C)③①②④
(D)④②①③

參考答案

答案:D
難度:困難0.31003
統計:A(75),B(107),C(45),D(102),E(0)

用户評論

etrnya】評論

基本步驟:(1)利用 PCR將欲分析之 DNA 片段放大。(2)將樣本中可能出現變異的 DNA 片段和正常型(或野生型)的 DNA 片段混合,加熱至95°C使 DNA 解離成單股結構後,再將溫度降到 65°C,使單股 DNA 互相結合形成異股DNA(heteroduplex) 。(3)異股 DNA 與兩種化學藥劑反應,這些化學藥劑特別針對配對錯誤(mismatch)的鹼基進行修飾,其中 Hydroxylamine 修飾配對錯誤鹼基中的胞嘧啶(Cytosine),過錳酸鉀(KMnO4)則會修飾配對錯誤鹼基中的胸腺嘧啶(Thymine) 。(4)後續加入的 Piperidine 會在 DNA 上被修飾的胞嘧啶及胸腺嘧啶位置進行切割。(5)切割後的反應物經由電泳分離,可以分析出特定片段內是否含有突變。