問題詳情

10. 以紫外線吸收法測定蛋白質含量的敘述,何者正確?
(A) 樣品需要經過濃硫酸分解
(B) 測定氮的含量後要乘上6.25氮係數
(C) 需要由已知蛋白質製作標準曲線
(D) 測定時溶液顏色需要為藍紫色

參考答案

答案:C
難度:適中0.571
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蛋白質檢測方法寧海德靈反應Ninhydrin測α胺基及羧基的游離胺基酸及胺化合物為生化試劑,指紋顯現試劑游離胺基酸及胺類+寧海德靈=藍紫色凱氏定氮法測量值*6.5=蛋白質量一些催化劑(如氧化汞或硫酸銅)可用來提高反應速率樣本的分解: 蛋白質 + H2SO4 → (NH4)2SO4(aq) + CO2(g) + SO2(g) + H2O(g)銨鹽的分解: (NH4)2SO4(aq) + 2NaOH → Na2SO4(aq) + 2H2O(l) + 2NH3(g)氨的固定: H3BO4 + NH3 → NH4H2BO4反滴定: NH4H2BO4 + HCL → NH4CL + H2BO4+H+紫外線吸收法蛋白分子中酪氨酸和色氨酸殘基的苯環含有共軛雙鍵,因此蛋白質具有吸收紫外線的性質,吸收高峰在280nm波長處,蛋白質溶液的光吸收值(A280)與其含量呈正比關係核酸在280波長處也有光吸收,對蛋白質的測定有干擾作用,但核酸的最大吸收峰在260nm處,通過計算可能消除其對蛋白質測定的影響優點:迅速、簡便、不消耗樣品,低濃度鹽類不干擾測定缺點:(1)對於測定那些與標準蛋白質中酪氨酸和色氨酸含量差異較大的蛋白質,有一定的誤差,(2)若樣品中含有嘌呤、嘧啶等吸收紫外線的物質,會出現較大的干擾。作為初步定量的依據